HPLC法测定维生素C口含片中维生素C含量的整体应用方案

方案概述

维生素C口含片属维生素类药，用于体内需大量补充维生素C时。

质量标准(国家食品药品监督管理局颁布，标准号WS1-(X-092)-2004Z)中规定用滴定法(碘量法)测定维生素C的含量，该法操作繁琐，影响因素较多，特别是专属性较差。

本文通过试验，建立了HPLC法测定该制剂中维生素C的含量。采用高效液相色谱法，准确、灵敏、重现性好，可作为维生素C口含片中维生素C含量测定的方法，以控制药品质量。

一、仪器与试药

高效液相色谱仪，包括泵、检测器、色谱工作站；

维生素C对照品(中国药品生物制品检定所，批号100425-200301 ) ；

维生素C口含片(协和药业有限公司，规格0.5g/片，每片含维生素C500mg，批号040301) ；

甲醇 (色谱纯)；

其余试剂均为分析纯。

二、实验方法

2.1色谱条件

色谱柱 : Inertsil ODS - 3， 4. 6×250mm ( GL SciencesInc)；

流动相 :己烷磺酸钠溶液 (取 0. 94g己烷磺酸钠，置1 000mL量瓶中 ，加冰醋酸 10mL ，加水稀释至刻度 ，摇匀 )

-甲醇 ( 6∶ ， pH = 3. 1；流速 : 0. 8mL /m in；柱温 :室温；检测波长 : 245nm；进样量 10μL。理论板数按维生素 C峰计算不低于 3 000。

2.2　测定波长的选择

取维生素 C对照品适量 ，加甲醇稀释成 0. 05mg /mL的溶液 ，在 200～400nm波长扫描，结果在 245nm波长处有最大吸收。故以 245nm为检测波长。

2.3对照品溶液的配制

精密称取维生素 C对照品 0. 025 0g，置 50mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀 ，精密量取 10mL ，置 100mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀 ，即得对照品溶液。

2.4供试品溶液的配制

取维生素 C口含片 ，研细 ，精密称取适量 (约相当于维生素 C 0. 025g) ，置 50mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀 ，精密量取 10mL ，置 100mL量瓶中 ，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀 ，滤过 ，即得供试品溶液。

2.5标准曲线的绘制

精密称取维生素C对照品0.0250g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取适量，加甲醇稀释成0.0125mg/mL、0.025mg/mL、0.0375mg/mL、0.05mg/mL、0.0625mg/mL、0.075mg/mL、0.0875mg/mL的对照品溶液。进样量为10μL。

以进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得回归方程:Y=272850X+22636，r=0.9999。结果表明，

维生素C在0.125～0.875μg之间呈现良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密量取对照品溶液10μL，连续进样5次，测定峰面积值。结果峰面积相对标准偏差RSD为0.17% ，表明本法精密度良好。

2.7稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h进样10μL，记录色谱图。结果相对标准偏差RSD为0.24% ，说明供试品溶液在 3h内基本稳定。

2.8重现性试验

取维生素C口含片样品6份，分别按供试品溶液制备的方法操作，按上述的色谱条件测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算维生素C含量。结果相对标准偏差RSD为0.26%，表明本方法有良好的重现性。

2.9空白试验

按处方比例和工艺，制备不含维生素C的空白样品，按样品测定方法制备，得空白溶液。通过进样分析试验可知，维生素C口含片中其他成分对测定无干扰。

2.10加样回收率试验

精密称取已知含量的维生素C口含片样品6份，样品量约为供试品溶液制备方法的一半量，精密加入维生素C对照品，分别按上述供试品溶液制备的方法操作 ，按上述拟定的色谱条件测定 ，记录色谱图，并计算加样回收率。结果表明，x为99.65%，RSD为0.38%。

2.11样品测定

按上述方法测定维生素C口含片的含量，并与WS1-(X-092)-2004Z的方法进行比较，共测定5份。结果见下表：

2.12　维生素C的检出限和定量限

经对维生素C对照品溶液逐步进行稀释，进样，得测定维生素C的检出限为1.5*10^-3μg（信噪比为3:1），定量限为5.0*10^-3μg（信噪比为10:1）。

三、结论

维生素C在空气中极不稳定，配制的溶液不宜久置，实验时应新鲜配制，以减少氧化。

利用HPLC法测定维生素C口含片中维生素C的含量，与滴定法相比，HPLC法更趋于灵敏、准确、重现性好，可作为该制剂中维生素C的含量控制方法。

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