国标GB/T18932.1-2002蜂蜜中碳-4植物糖含量测定方法

1、范围

GB/T18932的本部分规定了蜂蜜中碳-4植物糖含量的稳定碳同位素比率测定方法。本部分适用于各种蜂蜜中碳-4植物(玉米或甘蔗)糖含量的测定。

2、规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)

3、原理

试样在具有纯氧脉冲及催化剂存在的在线式全自动Dumas燃烧管中燃烧，经化学纯化及气相色谱仪GC分离后用稳定碳同位素质谱仪测定其δ¹³C值。以蜂蜜蛋白质δ¹³C值为标准，蜂蜜δ¹³C值与其进行比较，根据其差值来计算蜂蜜中碳-4植物糖的含量。

4、试剂及材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-1992规定的一级水。

橄榄油标准:%C=57.00,δ13C _PDB=一29.07%。

钨酸钠(Na₂WO₄·2H₂0 )

硫酸:优级纯

0.10mm-0.14mm孔径尼龙滤布。

10uL移液器。

8mmX5mm锡杯。

10%钨酸钠溶液:称取10g钨酸钠，用水定容至100ML。

0.335mol/L硫酸溶液:移取9.4ml,硫酸，用水定容至500mL

5、仪器

5.1 INTEGRA-CN在线式全自动稳定同位素质谱仪或相同性能的同位素质谱仪，δ13C测定精度0.1%。

载气:氦气，纯度99.999%;助燃气:氧气，纯度99.999% .

5.2 离心机:相对离心力(RCF) :1500Xg

5.3 水浴锅，十分之一电子天平，移液器，烘箱

6 试样制备与保存

6.1 试样制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并标明标记。

6.2 试样保存

将试样于常温下保存。

7 分析步骤

7.1 试料的制备

7.1.1 蜂蜜样品

蜂蜜样品经0.10mm-0.14mm孔径尼龙滤布过滤，除去蜂蜜中固体杂质后，用移液器移取3mL至8mmX5mm锡杯中，密封备用。每个样品制备2个

7.1.2 蜂蜜蛋自质样品

称取10g~ 12g洁净的蜂蜜样品于50mL离心管中，加人4mL水混匀。在一支20ml,量筒中加入2.0mL10%钨酸钠溶液和2.0mL0.335mol/L硫酸溶液，迅速混匀后，加到上述盛蜂蜜样品的离心管中，混匀。置于80℃水浴中加热不少于30min，在加热过程中每间隔5min-10min旋转混合离心管中内容物20s，直到有絮状物析出。以水注满离心管并混合后， 在RCF为1500Xg下离心5min，倾掉上层清液， 再以约50ml水充分洗涤沉淀物并离心，如此反复洗涤沉淀物5次，最后倒干上清液，将含有沉淀蛋白质的离心管置于750℃烘箱中干燥3h以上。然后，称取上述烘干的蛋白质3.0mg，于8mmX5mm锡杯中，密封备用，每个样品制备2个。

7.1.3 标准物及控制样品

移取2mL橄榄油标准于8mm X 5mm锡杯中，密封备用，此标物作为蜂蜜样品检验批的标准和控制样品移取1m1橄榄油标准于8mm X 5mm锡杯中，密封备用，此标物作为蜂蜜蛋白质样品检验批的标准和控制样品。

7.2 测定

7.2.1 位素质谱仪的预调

确认I N TEG RA- CN 同位素质谱仪的工作环境、 气密性、离子室的真空度均符合要求， 然后检验INTEGRA - CN的稳定性和峰 形， 必 要时调整离子源参数值。确认数据采集系统设置正确，必要时进行调整

7.2.2 检验批的设置

在碳同位素测定条件下，选定两点标准漂移校正模式， 设定标准名称， 输人标准参数， 根据待测样品的多少设定检验批。

7.2.3 试料测定

按照已设定检验批的顺序，在自动进样器上摆放好待测试料， 在计算机控制下， 运行检验批进行测定。测定完毕后， 试 料的δ13C 值由计算机自 动计算给出。同一样品的蜂蜜δ13C 值和其蛋白质δ13C值应在相同的仪器条件下测定。

8、结果计算

蜂蜜中碳一4植物糖的含量按式(1)计算:

式中:

X — 蜂蜜中碳-4 植物糖的百分含量;

δ13C_P—蜂蜜中蛋白质δ13C值;

δ13C _H—蜂蜜δ13C值;

- 9.7— 玉米糖浆的平均δ13C值。

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