高效液相色谱仪常见峰相关问题有哪些

    本文主要介绍高效液相色谱仪常见的有关峰的问题，可能的原因及解决办法。

1、出现肩峰或分叉      

①样品体积过大－－用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% ；    

②样品溶剂过强－－采用较弱的样品溶剂；    

③柱塌陷或形成短路通道－－更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件；      

④柱内烧结不锈钢失效－－更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品；    

⑤进样器损坏－－更换进样器转子。  

2、出现鬼峰 

①进样阀残余峰－－每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗；    

②样品中未知物－－处理样品；    

③柱未平衡－－重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）；    

④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化剂 ；    

⑤水污染（反相）－－通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 。  

3、出现峰拖尾 

①柱超载－－降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相；    

②峰干扰－－清洁样品,调整流动相；

③硅羟基作用－－加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品  ；  

④柱内烧结不锈钢失效－－更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 ；    

⑤柱塌陷或形成短路通道－－更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件；    

⑥死体积或柱外体积过大－－连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 ；  

⑦柱效下降－－用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。    

4、使峰位发生重排      

在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度（组成百分比）而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。    

下列条件改变可能发生峰位重排：流动相中换了强溶剂；PH值的改变；柱填料的改变；柱温的改变；流动相的组成改变（如加入离子对试剂三乙基胺等）。

5、出现峰展宽     

①样品体积过大－－用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% ；    

②在进样阀中造成峰扩展－－进样前后排出气泡以降低扩散  ；  

③数据系统采样速率太慢－－设定速率应是每峰大于10点  ；  

④检测器时间常数过大－－设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% ；    

⑤流动相粘度过高－－增加柱温,采用低粘度流动相；    

⑥检测池体积过大－－用小体积池,卸下热交换器；    

⑦保留时间过长－－等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱；  

⑧柱外体积过大－－将连接管径和连接管长度降至最小；    

⑨样品过载－－进小浓度小体积样品 。

6、出现倒峰 

所用的流动相在检测波长下有吸收，而进在此波长下没有吸收或吸收低于流动相的溶液，在流动相中会出现洞穴，通过柱后出现倒峰。    

7、出现“胖”峰和平头峰     

用比流动相强度大的大体积样品进样，通常会损害色谱图的质量，而出现“胖”峰和平头峰。

应遵循下列规则选用溶剂溶解样品：A最好用流动相溶解样品进样。B用大体积弱溶剂溶解样品，如反相色谱中用水溶解样品进样，主要缺点是每次进样后在色谱图的开头出现大的负峰，有时还波及到样品峰。C需要时用强溶剂溶解进样。   

8、前延峰的发生及处理 

因柱温问题很易引起前延峰，有些样品在常温下分离可见前延峰，提高温度后前延峰的现象消失。在离子对色谱中，前延峰的另一个原因是用非流动相作样品溶剂。因此在离子对色谱中要求仅用流动相溶解样品，而且进样量不要太大，否则会导致前延峰或其它问题。在RP-HPLC中样品溶液的强度大于流动相引起前延峰。增加流动相的强度，减少样品溶液的强度，在离子对色谱中增加离子强度，可以克服前延峰的效应。此外使用流动相溶解样品是解决的最简单实用的方法。

9、峰变宽的原因  

A、在使用过程中柱本身退化，逐渐降低柱效。

B、柱外峰宽效应。一根很好的专用柱用于另一液相色谱系统引起塔板数降低，说明新系统有很大的柱外峰宽效应

C、化学效应，多数是流动相和固定相相互作用所致，改变流动相可使宽峰有所改善。